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| 反應種屬 | 小鼠 |
| 檢測范圍 | 0.5ng/mL-16ng/mL |
| 物理性能 | 試劑盒的各液體組分應澄清透明、無(wú)沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應真空包裝，無(wú)破損漏氣。 |
| 用途 | 定量檢測血清、血漿、細胞培養上清液等樣本中小鼠骨特異性堿性磷酸酶B(ALP-B)的濃度。 |
| 實(shí)驗原理 | 本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。在預包被抗小鼠骨特異性堿性磷酸酶B(ALP-B)抗體（固相抗體）的微孔酶標板中，加入小鼠骨特異性堿性磷酸酶B(ALP-B)校準品和待測樣本，再加入另一株HRP標記的抗小鼠骨特異性堿性磷酸酶B(ALP-B)抗體（酶標抗體），經(jīng)過(guò)溫育與充分洗滌，去除未結合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗體-抗原-酶標抗體的夾心復合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，產(chǎn)生藍色產(chǎn)物，在終止液（2M硫酸）作用下，最終轉化為黃色，在酶標儀450nm波長(cháng)上測定吸光度（OD值），吸光度（OD值）與待測樣品中小鼠骨特異性堿性磷酸酶B(ALP-B)的濃度正相關(guān)。擬合校準品曲線(xiàn)，可以計算出樣本中小鼠骨特異性堿性磷酸酶B(ALP-B)的濃度。 |
| 特異性 | 本試劑盒識別天然和重組小鼠骨特異性堿性磷酸酶B(ALP-B)，與結構類(lèi)似物無(wú)交叉。 |
| 重復性 | 板內變異系數均<10%，板間變異系數均<15%。 |
| 回收率 | 回收率在 85%-115%之間。 |
| 試驗所需自備試驗器材 | 1、酶標儀（450nm） 2、精密移液器及一次性吸頭 3、蒸餾水 4、洗瓶或者自動(dòng)洗板機 5、37℃水浴鍋或恒溫箱 6、500ml 量筒 |
| 操作程序 | 所有試劑和組分都先恢復到室溫，標準品、質(zhì)控品和樣品，建議做復孔。 1、按前面說(shuō)明書(shū)描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。 2、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。 3、設置標準品孔、0值孔、空白孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL，0值孔加樣本稀釋液50μL，空白孔不加；血清/血漿：樣本孔中加入待測樣本 10 μL+40μL樣本稀釋液（相當于稀釋5倍，根據情況可改變稀釋倍數）；其他類(lèi)型樣本：樣本孔中加入待測樣本 50 μL（建議做預實(shí)驗） 4、除空白孔外，標準品孔、0值孔和樣本孔，加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL。 5、用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光孵育60min。 6、揭開(kāi)封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置20S，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復5次。若使用自動(dòng)洗板機，請按洗板機操作程序進(jìn)行洗板，添加浸泡30s的程序，可以提高檢測的精度。洗板結束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應板。 7、將底物A和B按1:1體積充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光孵育15min。 8、所有孔加入終止液50μL，在酶標儀450nm波長(cháng)上讀取各孔吸光度（OD值）。 |
| 注意事項 | 1：如果試劑盒的組份需要再次使用，請確保上一次使用之后沒(méi)有被污染。 2：酶標板單次未使用完，要謹記密封放到 2-8℃保存。 |
| 問(wèn)題分析 | ①問(wèn)題描述：標準曲線(xiàn)差 可能原因及相應對策： 1.試劑盒平衡時(shí)間不夠——不低于 2 個(gè)小時(shí)的室溫平衡 2.吸取及洗滌不充分——充分的吸取及洗滌 3.移液不精確——檢查和校正移液器 ②問(wèn)題描述：精密度低 可能原因及相應對策： 1.洗滌不充分——按說(shuō)明書(shū)要求充分洗滌和浸泡 2.混勻不充分和吸取試劑不足——充分混勻和吸取試劑 3.重復利用吸頭、容器和覆膜——使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的封板模 4.加樣不精確——檢查和校正移液器 ③問(wèn)題描述：O.D值低 可能原因及相應對策： 1.每孔加的試劑量不精確——校正移液器，精確加入試劑 2.溫育時(shí)間不正確——保證充足的溫育時(shí)間 3.溫育溫度不正確——試劑要平衡至室溫并保證準確的溫育溫度 4.酶標記物或底物失效——通過(guò)混合酶標記物和底物，顏色迅速顯現來(lái)檢查 5.沒(méi)有加入終止液——按照說(shuō)明書(shū)實(shí)驗操作步驟加入終止液 6.超出讀數時(shí)間讀數——在說(shuō)明書(shū)推薦的讀數時(shí)間內讀數 ④問(wèn)題描述：樣本值 可能原因及相應對策： 1.不正確的樣本儲存方式——正確儲存樣本，使用新鮮樣本進(jìn)行實(shí)驗 2.不正確的樣本收集和處理方法——采取正確的樣本收集和處理方法 3.待測物質(zhì)在樣本中含量低——使用新鮮樣本，重復實(shí)驗 |
| 聲明 | 該試劑盒僅供研究使用，如將其用于臨床診斷或任何其他用途，我公司將不對因此產(chǎn)生的問(wèn)題負責，亦不承擔任何法律責任。 |
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