操作高靈敏elisa試劑盒要注意那些問(wèn)題？

發(fā)布時(shí)間：2020/12/1 10:43:17 閱讀次數：1429

正確操作是檢驗實(shí)驗的標準,所以我們每一個(gè)步驟都至光重要,不可忽視,因為這關(guān)系到實(shí)驗成功的關(guān)鍵是否.為了更好的進(jìn)行高靈敏elisa試劑盒實(shí)驗,下面給大家介紹一下操作高靈敏elisa試劑盒要注意那些問(wèn)題.

1 吸取液體時(shí)速度不易太快,以免產(chǎn)生氣泡,吸取的量不夠準.

2 手工洗板時(shí)每次加入洗滌液后.應靜置15～30s,不要將一個(gè)酶標孑L中的洗滌液濺入另一酶標孔中,防止交叉污染.甩去洗滌液后將酶標板放在毛巾或吸水紙上拍干.

3 底物為T(mén)MB,避免與皮膚相接觸.終止液為2tool的濃硫酸具有腐蝕性,應盡量避免接觸皮膚.

4 加樣后及時(shí)放人孵箱,標本較多時(shí),要分批操作.按說(shuō)明步驟嚴格控制操作時(shí)間,防止孵育時(shí)間人為延長(cháng),導致非特異性結合緊附于反應孔周?chē)?難以清洗徹底.

5 作時(shí)必須戴手套,穿工作衣,嚴格執行消毒隔離制度.

6 剩余樣品及廢棄物應經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘,或用5 0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄.

7 同批號試劑組分不得混用.

8 洗滌時(shí)各孔均需加滿(mǎn)液體,防止孔口有游離酶不能洗凈.

9 每次實(shí)驗留一孔作為空白調零孔,該孔不加任何試劑,只是zui后加底物溶液及2N H2SO4.測量時(shí)先用此孔調OD值至零.

10 要確保微量加樣器的準確性,可以使用蒸餾水和電子天平進(jìn)行確定（由于蒸餾水不含雜質(zhì),溫度環(huán)境為20%左右時(shí),lmL的水可以看作是lg 200 L的水可以看作是0 2g）每一把微量加樣器都應該將其zui高量程和zui低量程進(jìn)行確定.

11 在使用微量加樣器時(shí),吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭,即使吸取標準品溶液.

12 檢驗技師應具備從事實(shí)驗室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗.能熟練操作實(shí)驗儀器器械,具有一定總結和分析問(wèn)題的能力,對實(shí)驗中出現的意外情況能及時(shí)妥善解決.

13 操作前仔細閱讀說(shuō)明書(shū),嚴格按照說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行規范化操作.不同批號的試劑不可混用.值得改進(jìn)的地方,反復試驗確定成立后才能改進(jìn),比如洗板次數的掌握等.

14 評估試劑的實(shí)用性,試劑的穩定與否,對準確率的高低到頭重要.在試劑啟用前,應進(jìn)行陰陽(yáng)對照及樣品反復比照試驗,判定試劑符合要求后方可使用.

15 加樣要準確快速.加樣不準確,酶生成物的量不能確定,直接影響顯色結果.另外,顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān),所以加樣應慎重.要求在一定時(shí)間內加樣完畢的實(shí)驗,如果加樣遲緩,便出現誤差,而且試劑長(cháng)時(shí)間暴露在外,尤其室溫過(guò)高時(shí),保存期會(huì )縮短甚至失效.

16 使用校對過(guò)的微量移液器,排除自然誤差.移液器準確與否對定量檢測尤為重要

17 嚴格掌握顯色時(shí)間,顯色時(shí)間過(guò)短,加入終止液反應終止后,底物結合物的量過(guò)少,易出現假陰性.超過(guò)顯色要求時(shí)間后顯色,應判為假陽(yáng)性,這可能與試劑本身有關(guān).加顯色劑后立即顯色,不可報陽(yáng)性,這可能是本底顯色的結果.

18 洗滌徹底,洗板不徹底,酶結合物本底顯色會(huì )呈現假陽(yáng)性.另外,洗滌液要新鮮,現用現配,陳舊的洗滌液會(huì )出現本底增高現象,也可能出現假陽(yáng)性.

19 嚴控反應時(shí)間,反應時(shí)間過(guò)長(cháng),酶失活；反應時(shí)間過(guò)短,酶結合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結合,生成物結構松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假陰性.

20 ELISA檢測操作步驟復雜,可強各環(huán)節的質(zhì)量控制,才能得到準確可靠的檢測結果.（內容僅供參考,如有問(wèn)題請來(lái)電咨詢(xún),我們會(huì )竭誠為您服務(wù)）